ROS活性氧檢測(cè)利用熒光探針DCFH-DA進(jìn)行活性氧的檢測(cè)。DCFH-DA本身沒(méi)有熒光，可以自由穿過(guò)細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無(wú)熒光的DCFH生成有熒光的DCF，檢測(cè)DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。
ROS活性氧檢測(cè)的具體方法：
1、 抗體：事先咨詢，明確抗體種屬以及是否有該抗體可使用，如有一抗使用費(fèi)300元每指標(biāo)，如無(wú)可由雙方協(xié)商而定，客戶自己購(gòu)買(mǎi)提供或我公司代購(gòu)；
2、 標(biāo)本收集與保存：
組織樣品 新鮮組織放入液氮或-70度保存，組織不少于100mg（約綠豆大小）；
培養(yǎng)細(xì)胞 通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)取不少于2000000個(gè)細(xì)胞于EP管，加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑，混勻后保存于冰箱（-70℃，避免反復(fù)凍融）；
血液細(xì)胞標(biāo)本 以抗凝管保存血樣或以淋巴細(xì)胞分離液分離細(xì)胞后加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑，保存（-70℃可長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融）
血清或細(xì)胞培養(yǎng)液標(biāo)本 離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管，保存（以上4℃可保存15-20天，-70℃可長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融）
3 、 樣本運(yùn)輸：可選以下的一種方式寄送標(biāo)本
組織樣本、細(xì)胞樣本以干冰運(yùn)輸或加入蛋白保護(hù)劑后加冰袋運(yùn)輸；
細(xì)胞樣本也可以直接快件寄送培養(yǎng)瓶（密封不污染，培養(yǎng)液不漏出，細(xì)胞不要長(zhǎng)得太滿，50%左右，灌滿培養(yǎng)液）；
血清或上清液直接加冰袋寄送（密封液體不漏出，視路途遠(yuǎn)近2-3天可到達(dá)）。
